Microbiología

Virus neutralización cruzada (VN)

La relación antigénica de diferentes virus de Gumboro se calcula basándose en los títulos de neutralización obtenidos con antisueros heterólogos y homólogos.

Utilizando esta técnica Jackwood y Saif (1987) consiguieron distinguir 6 subtipos entre 13 cepas analizadas del serotipo 1 del virus de la Enfermedad de Gumboro.

Prueba de ELISA por captura de antígeno (AC-ELISA)

Se analizan los aislados del virus de la Enfermedad de Gumboro utilizando la prueba de ELISA basada en un panel de anticuerpos monoclonales, los cuales están dirigidos a epítopos específicos del virus.
Los virus se clasifican de acuerdo al padrón encontrado en la reacción.
Se pueden analizar directamente muestras de Bolsa de Fabricio por medio de ésta técnica
Snyder et al (1988) demostraron que las cepas clásicas del virus de la Enfermedad de Gumboro daban una reacción positiva a la reacción con los anticuerpos monoclonales R63 y B69.
Las variantes del virus de Gumboro no reaccionaron con el anticuerpo monoclonal B69, indicando un gran desvío antigénico
La siguiente tabla ilustra la caracterización antigénica de ciertos virus de Gumboro conocidos frente al panel de anticuerpos monoclonales.

Cepa de virus	Clasificación	Reacción con anticuerpos monoclonales
Cepa de virus	Clasificación	B29	BK44	8	R63	B69	BK9	57	10	42
F52/70	Clásico	+	+	+	+	+	-	-	-	+
Var.E/Del.	Variante tipo Delaware	+	+	+	+	-	+	-	-	-
GLS-5	Variante tipo GLS	+	+	+	-	-	-	+	+	+

Las prueba de RT/PCR-RFLP (del inglés: reverse transcriptase / polymerase chain reaction = reacción en cadena con polimerasa y transcriptasa - restrictive fragment length polymerase = reacción de la polimerasa restrictiva de la extensión del fragmento)

La prueba de RT/PCR-RFLP se ha vuelto una herramienta popular de diagnóstico:
- rápido diagnóstico
- detección directa en material de la Bolsa
- detección del virus de la Enfermedad de Gumboro en muestras preservadas en solución de fenol o cloroformo, permitiendo el transporte de muestras alrededor del mundo.
La prueba tiene 2 partes:
1. RT/PCR: amplifica un fragmento específico del gen de la VP2
2. RFLP: se digiere el segmento amplificado de la VP2 por enzimas restrictivas específicas. Los fragmentos resultantes luego se examinan por electroforesis en gel.
Basándose en el patrón de los diferentes fragmentos se pueden identificar y clasificar los diferentes virus de la Enfermedad de Gumboro en diferentes grupos moleculares.

Jackwood et al (2001) identificaron 6 grupos moleculares.

Las cepas dentro de un grupo se relacionan por su ascendencia.

Los perfiles de la prueba de RFLP pueden predecir la diferencia genética relativa entre cepas del virus de la Enfermedad de Gumboro, no obstante para determinar las diferencias entre los virus se requiere de pruebas in vivo.

La prueba detecta secuencias genéticas en la sección del gen de la VP2 que es responsable por la antigenicidad, por tanto, virus con perfiles similares en la prueba de RFLP son potencialmente antigénicamente similares.

Igualmente, virus con perfiles diferentes en la prueba de RFLP son potencialmente diferentes.

No obstante, algunos de los campos identificados en los perfiles de la prueba de RFLP pueden no afectar la secuencia de la VP2 y por tanto las características antigénicas del virus. Existe entonces la posibilidad de que virus con diferentes perfiles en la prueba de RFLP sean antigénicamente similares.

Nota: La prueba de RFLP solo se concentra en la observación de un número de pares de bases en la zona hipervariable de la VP2 (cortándo solo algunos sitios con pocas enzimas, en lo que corresponde a solo 10-20% de la región hipervariable. Para establecer el árbol filogénico del virus es necesario secuenciarlo.

Revisado por los Dr J J (Sjaak) de Wit y William Baxendale.