- La prueba de RT/PCR-RFLP se ha vuelto una
herramienta popular de diagnóstico:
- rápido diagnóstico
- detección directa en material de
la Bolsa
- detección del virus de la Enfermedad
de Gumboro en muestras preservadas en solución
de fenol o cloroformo, permitiendo el transporte
de muestras alrededor del mundo.
- La prueba tiene 2 partes:
- RT/PCR: amplifica un fragmento específico
del gen de la VP2
- RFLP: se digiere el segmento amplificado
de la VP2 por enzimas restrictivas específicas.
Los fragmentos resultantes luego se examinan
por electroforesis en gel.
- Basándose en el patrón de los
diferentes fragmentos se pueden identificar
y clasificar los diferentes virus de la Enfermedad
de Gumboro en diferentes grupos moleculares.
- Jackwood et al (2001) identificaron 6 grupos
moleculares.
- Las cepas dentro de un grupo se relacionan
por su ascendencia.
- Los perfiles de la prueba de RFLP pueden predecir
la diferencia genética relativa entre
cepas del virus de la Enfermedad de Gumboro,
no obstante para determinar las diferencias
entre los virus se requiere de pruebas in vivo.
- La prueba detecta secuencias genéticas
en la sección del gen de la VP2 que es
responsable por la antigenicidad, por tanto,
virus con perfiles similares en la prueba de
RFLP son potencialmente antigénicamente
similares.
- Igualmente, virus con perfiles diferentes
en la prueba de RFLP son potencialmente diferentes.
- No obstante, algunos de los campos identificados
en los perfiles de la prueba de RFLP pueden
no afectar la secuencia de la VP2 y por tanto
las características antigénicas
del virus. Existe entonces la posibilidad de
que virus con diferentes perfiles en la prueba
de RFLP sean antigénicamente similares.
Nota:
La prueba de RFLP solo se concentra en la observación
de un número de pares de bases en la zona
hipervariable de la VP2 (cortándo solo
algunos sitios con pocas enzimas, en lo que corresponde
a solo 10-20% de la región hipervariable.
Para establecer el árbol filogénico
del virus es necesario secuenciarlo.
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Revisado por los
Dr J J (Sjaak) de Wit y
William Baxendale.
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